叶绿素的提取和分离

    叶绿素的提取和分离如何操作？如果是为了测量叶绿素含量的话，小编还是建议大家利用叶绿素测量仪直接检测，就省去了提取和分离环节。但如果是用于其他研究的话，掌握以下方法还是非常重要的。
    一、叶绿素的提取
    叶绿素提取的准备工作是在一个半暗的房间里，室温保持在25℃。提取步骤如下： 
    (1)取1000克新鲜的绿叶，在韦氏搅切器中粉碎。
    (2)将粉碎的1000克绿叶放进加有少量的碳酸钙的丙酮中(温度20℃)进行萃取，直到过滤、清洗后的叶子碎片为无色。
    (3)将过滤后的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中，然后轻轻地旋转，同时加放蒸馏水直到分层为止。水层的大部分丙酮和水溶杂质被丢弃，只剩石油醚溶液。
    (4)将石油醚溶液用蒸馏水再次净化后，用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上，最后得到黄绿色悬浮液。
    (5)用无水硫酸钠对悬浮液进行干燥，并将其渗入到3cm厚的蔗糖粉末制成柱中，然后用石油醚清洗沉淀的色素去掉类胡萝卜素，使之只含有天然的叶绿素。
    (6)含有天然叶绿素的蔗糖柱分两层，绿层有4-10mm的叶绿素b层，另一蓝层为2-6mm的叶绿素a层。 
    (7)将位于蓝层正中的部分(约占蓝层的一半) 放入醚中，对此悬浮液进行过滤、洗提，用蒸馏水清洗，用硫酸钠干燥，再用器皿进行过滤后，得到叶绿素a。
    (8)将(6)中的绿层中间部分移出，迅速放入醚中过滤、洗提，制成叶绿素b醚溶液。
二、叶绿素的分离
    (1)制备滤纸条：剪去一端两角，在距离剪角一端1~1.5 cm处用铅笔画线（或简单做个记号）。
    (2)画滤液细线：用毛细吸管吸收少量滤液，沿铅笔线（记号）处均匀地画一条直的滤液细线。干燥后，连续重复3～5次，至滤液细线呈绿色。
    (3)分离色素：倒入层析冻存管2～3 ml层析液，适当调节层析液液面，以放入滤纸条后样品线至少稍稍高出滤液为宜。以将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液，旋紧盖子。
    (4)观察实验结果并记录实验现象：当推动剂前沿接近滤纸上端边缘时，取出滤纸，自然晾干，观察色带的分布：四种色素在滤纸上的移动速度是胡萝卜素(橙黄色)>叶黄素(黄色)>叶绿素a(蓝绿色)>叶绿素b(黄绿色) 。用铅笔标出各种色素的位置和名称。